基因型
F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)
产品说明
Tuner（DE3）菌株是BL21菌株的 lacZY基因（半乳糖苷透性酶基因）突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。此菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶，该区整合于Tuner的染色体上，所以称为Tuner（DE3） ，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner（DE3）感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg。
操作方法
1. 取100μl冰上融化的Tuner（DE3）感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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