中文名称：DH10B电击感受态细胞  

规格：100ul*2支 

用途：生化试剂。（用于科研试验研究）  

保存：特殊细胞需要-80℃保存  

基因型  

F-mcrA?(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZ?M15?lacX74recA1endA1araD139?(ara,leu)7697galE15galKλ-rpsLnupG  

产品说明  

DH10B感受态细胞只能用于电击转化而不能用于热激转化。DH10B菌株来源于MC1061菌株，mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(无论真核生物还是原核生物的基因组DNA都能被高效的转入DH10B中)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。φ80dlacZ?M15标记的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选，rpsL赋予其链霉素抗性。DH10B感受态细胞适用于大质粒的构建或者各种文库构建。DH10B感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测，转化效率>1010cfu/μg。  

操作方法  

1.0.1cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟，待其沥干水分，正置5分钟，使乙醇充分挥发，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电极杯顶离冰面0.5cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。  

2.取-80℃保存的DH10B感受态细胞放入冰浴中融化，加入1μl目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀立即插入冰中。  

A.测定转化效率使用1μl10pg/μl的对照质粒pUC19；  

B.对于连接产物，请用乙醇沉淀DNA后适量TE缓冲液(10mMTrisHCl,pH7.5;1mMEDTA)重悬，保证DNA浓度不超过100ng/μl。  

3.用200μl枪头将感受态-质粒混合物快速移到电击杯中，避免产生气泡，盖上杯盖。  

4.启动电转仪，设置参数：C=25μF，PC=200Ω，V=2.4kV(此为BioRad电转仪推荐参数，使用者也可按所用电转仪推荐的参数操作），将电击杯快速放入电转槽中，电击完成快速插入冰中。  

5.向电击杯中加入700μl不含抗生素的无菌培养基S.O.C.，混匀后转移到空EP管中，37℃，200rpm复苏60分钟。  

4.5000rpm离心一分钟收菌，重悬后取100-200μl涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13h。  

注意事项  

1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10。  

2.当质粒不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。  

3.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。  

4.对于连接产物转化，最好转化前用乙醇沉淀DNA后适量TE缓冲液(10mMTrisHCl,pH7.5;1mMEDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加打火的风险。  

5.混入质粒时应轻柔操作。  

6.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。