中文名称:OrigamiB(DE3)感受态细胞
规格:0.1ml*10支
用途:生化试剂。(用于科研试验研究)
保存:-80℃
基因型
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmlacY1ahpC(DE3)gor522::Tn10trxB(KanR,TetR)
产品说明
OrigamiB(DE3)感受态细胞包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathionereductase)(gor)基因,表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。经pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg。
操作方法
1.取100μl冰上融化的BL21(DE3)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。