R2A琼脂培养基用于纯化水中菌落总数的测定，（EP、USP、Chp标准）

配方：

酵母浸出粉          0.5

蛋白胨                0.5

酪蛋白水解物       0.5

葡萄糖                0.5

可溶性淀粉          0.5

磷酸氢二钾          0.3

无水硫酸镁       0.024

丙酮酸钠             0.3

琼脂                 15.0

pH值7.2 ± 0.2    25℃

 

调整PH值，使得R2A琼脂灭菌后的PH值为7.2±0.2。使用高压锅，121°C下高压灭菌15分钟。

 

不同药典关于纯化水的微生物检测方法和质量标准

中国药典

    【检查】 微生物限度 取本品不少于 1ml，按薄膜过滤法处理后，采用 R2A 琼脂培养基，30～35℃培养不少于 5 天，依法检查（通则 1105），每1ml 供试品中需氧菌总数不得过 100cfu。

操作简述：

    除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节 pH 值使加热后在 25℃的 pH值为 7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。 R2A 琼脂培养基适用性检查试验 照通则 1105 中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。应符合规定。

USP标准

    在美国药典中，推荐使用0.45μm薄膜过滤法，并同时使用高营养培养基（平板计数琼脂培养基（PCA））于30-35℃培养72小时以上，和低营养培养基（R2A琼脂）于20-25℃培养96小时以上。检测标准为：≤100cfu/ml 。

操作简述：（可根据实际情况调整）

    量取10ml充分混匀的水样，以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用 pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml,共冲洗1次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于琼脂平板上。共制备 2张滤膜，一张滤膜贴于平板计数琼脂培养基平板（高营养培养基）置30℃~35℃生化培养箱中倒置培养2~3天，计数。另一张滤膜贴于R2A琼脂平板（低营养培奍基），置20℃~25℃生化培养箱倒置培养5~7天，计数。以培养基平板上菌落数生长较多者作为检测结果， 按比例折算为1ml纯化水中的微生物数量后报告。

EP标准

    在欧洲药典中使用薄膜过滤法（0.45μm 孔径滤膜），使用 R2A 琼脂培养基在 30℃～35℃培养 5 天以上。 质量标准：≤100cfu/mL。

操作简述：（可根据实际情况训整）

    量取 10ml 充分混匀的水样，以无菌操作加入 安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用 pH7.0 的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜 每次冲洗量为 100ml，共冲洗 1 次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于 R2A 琼脂平板上, 置 30℃～35℃生化培养箱中倒置培养 5 天，计数。按比例折算为 1ml 纯化水中的微生物数量后 报告。