基因型
F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcmrne131(DE3)
产品说明
High5TM系列BL21Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，含有rne131基因突变体，rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高蛋白表达能力。主要适用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。BL21Star(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg。
操作方法
1.取100μl冰上融化的BL21Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2mM均可）。
5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间、温度以及IPTG浓度需实验者优化。
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