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大蒜细胞SOD的提取与沉淀分离
点击次数:239 发布时间:2017-05-16
 

一、超氧化物歧化酶(SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可催化超氧负离子进行歧化反应,生成氧和过氧化氢。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD,通过组织或细胞破碎后,可用PH7.8的磷酸缓冲液提取。由于SOD不溶于丙酮,可用丙酮将其沉淀析出。

二、材料与试剂:大蒜、磷酸缓冲液(0.05M,PH7.8的磷酸缓冲液)、氯仿-乙醇混合溶剂(氯仿:无水乙醇=3:5V/V)、丙酮(用前冷却4-10℃)、磷酸盐缓冲液(0.05M,PH10.2)

三、操作方法

1、组织或细胞破碎:称取5g左右大蒜,置于研磨器中研磨,使组织或细胞破碎。

2、SOD的提取:将上述破碎的组织,加入2-3(10-20ml)倍体积的0.05M,PH7.8的磷酸缓冲液,继续研磨搅拌20min,使SOD充分溶解到缓冲液中,然后用离心机在5000r/min下,离心15min,弃沉淀,得提取液。

3、除杂蛋白:提取液加入0.25倍体积得氯仿-乙醇混合溶剂搅拌15min,5000r/min离心10min得SOD沉淀。

 
 
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