3.1 材料 雄性小白鼠
3.2 器材
离心机、显微镜、水浴、培养皿、镊子、剪刀、吸管、烧杯、量筒、离心管(10ml)、酒精灯。
3.3试剂 (所用试剂均为AR级)
3.3.1 0.7%柠檬酸钠(柠檬酸三钠)溶液。
3.3.2 3%中性福尔马林(甲醛溶液):甲醛8.3ml,醋酸钠() 1.1g,加蒸馏水91.7ml。
3.3.3 50%硝酸银溶液
3.3.4 明胶显影液: 称取2g明胶(gelatin)粉末溶解于99ml蒸馏水中,加1ml甲酸。
3.3.5. 甲醇-冰醋酸
4.实 验 方 法
脱颈处死动物取睾丸
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放2ml 0.7%柠檬酸钠培养皿中
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释放曲细精管内容物(剪开白膜,用解剖针和小弯镊挟出曲细精管并剪碎,用吸管轻轻吹打)
↓移至刻度离心管中
加8ml 0.7%柠檬酸钠溶液制成细胞悬液
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室温下低渗45~60min
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低渗终止前10min,加3%中性甲醛溶液0.3ml,至最终浓度为0.1%,混匀
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常规离心(1000r/min)
↓弃上清
甲醇和冰醋酸(3:1)混合液固定
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空气干燥法制片(关键是长时间的低渗液处理和添加福尔马林溶液)
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银染 |