一、大肠杆菌质粒dna的提取

质粒dna的提取是从事基因工程工作中的一项基本实验技术，但提取方法有很多种，以下介绍一种最常用的方法：

碱裂解法：此方法适用于小量质粒dna的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下：

1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml lb培养基。

2、37℃振荡培养过夜。

3、取1.5ml菌体于Ep管，以4000rpm离心3min，弃上清液。

4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/L EDTA pH8.0，25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。

5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH，1％ SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。

6、加入0.15m1预冷溶液III(5 mol/L KAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5 min 。

7、以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管

8、加入等体积的异戊醇，混匀后于?0℃静置10min。

9、再以10，000rpm离心20min，弃上清。

10、用70％乙醇0．5ml洗涤一次，抽干所有液体。

11、待沉淀干燥后，溶于0．05mlTE缓冲液中

煮沸法 
　　1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000ｇ离心30秒。 
　　2、弃上清，将管倒置于卫生纸上几分钟，使液体流尽。 
　　3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中, 涡旋混匀。 
　　4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。
　　5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。 
　　6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。
　　7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。 
　　8、取20ml进行电泳检查。