1.毕赤酵母表达常用溶液及缓冲液的配制

 

1.1 各种母液的配制

 

10*YNB：（含有硫酸铵、无氨基酸的13.4%酵母基础氮源培养基） 4℃保存。34g酵母基础氮源培养基（无硫酸铵）+100g硫酸铵，溶于1000ml水中，过滤除菌。

 

500*B：（0.02%生物素 Biotin）  4℃保存 保存期为1年。20mg的生物素溶于100ml水中，过滤除菌。

 

100*H：（0.4%Histidine 组氨酸） 4℃保存 保存期为1年。400mg的L-组氨酸溶于100ml水中，（加热至50℃以促进溶解），过滤除菌。

 

10*D：（20%Dextrose 葡萄糖）保存期为1年。200g葡萄糖溶于1000ml水中，灭菌15min或过滤除菌。

 

10*M：（5%Methanol  甲醇）   保存期为2个月。将5ml的甲醇与95ml水混匀，过滤除菌。

 

10*GY：（10%Glycerol  甘油） 保存期为1年以上。将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。

 

100*AA：（0.5% of each Amino Acid，各种氨基酸）  4℃保存 保存期为1年。分别将500mg的L-谷氨酸、L-蛋氨酸、L-赖氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸溶于100ml水中，过滤除菌。

 

1M 磷酸钾溶液（potassium phosphate buffer，pH6.0），将1mol/L的K2HPO4溶液132ml与1mol/L的KH2PO4溶液868ml混匀，其pH为6.0，如需调节pH，则使用磷酸和氢氧化钾调节pH。

 

1.2 常用溶液及缓冲夜

 

1.2.1 碱裂解法抽提质粒DNA所用溶液：

 

溶液Ⅰ：50mmol / L glucose，100mmol / L EDTA，25mmol / L Tris－HCI (pH 8.0)

 

溶液Ⅱ：0.2mol／L NaOH，1％ SDS（临用时配制）

 

溶液Ⅲ：29.44g KAc，11.5ml Acetic acid，加ddH2O至100 ml。

 

4℃保存。

 

1.2.2 10% 甘油 （Glycerol）：

 

将100ml甘油和900ml水混匀后，高压灭菌或过滤除菌。保存期为1年以上。

 

1.2.3  Rnase-H2O：

 

1ul Rnase 加入1ml 灭菌 dd H2O。4℃保存。