一、准备工作

 

准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。

 

1、清洁、消毒、液体

 

直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子

 

直接接触细胞的用品要彻底消除微生物

 

超净和消毒过的样品要绝对密闭保存，标记消毒时间

 

实验室保持洁净，随时消毒

 

尽量采用商品化一次性用品

 

操作者也要清洁和消毒

 

缓冲液要符合生理渗透压（280～310 mOsm）和pH（7.2～ 7.4 ）

 

2、玻璃器皿超净

 

去污剂煮沸30min（超声波震荡30min） 温水刷洗 流水冲洗 酸性洗涤液浸泡 流水冲洗 蒸馏水冲洗 纯水漂洗 在洁净温箱中烤干 密封消毒

 

3、消毒

 

干热——玻璃器皿  160℃，120min

 

湿热（高压，120 ℃ ）  10~20磅，20~30min

 

紫外线——空气

 

消毒剂——场面

 

微孔过滤——液体  0.22um、0.45um

 

二、细胞生长的条件和培养基要求：

 

选择合适的培养基，保证全过程的无菌

 

细胞的营养需要：氨基酸、维生素、碳水化合物、无机离子、蛋白质、促生长因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10％的胎牛或新生牛血清。

 

培养基的制备：a..浓度要准－渗透压、b. 酸碱度要适宜－酸度计

 

细胞的生存环境：a.. 温度、b.气相、 c.渗透压－－290mmol/L