将小鼠颅段神经管组织块（第6体节前）经0.75mg/ml胶原酶（152U/mg）换液消化3次，37℃20分钟孵育后，轻吹打获神经管，胶原酶通过冷培养基反复置换。

将神经管组织块置于经Fn预孵的75MM培养瓶中（0.25mg/ml纤粘连蛋白抽干后，以条件培养基洗涤备用），37℃培养30分钟后组织块贴壁，加DMEM/F12无血清条件培养基。48小时后去除组织块。2.5g／L胰蛋白酶常规消化传代。

无血清条件培养基的配方：在DMEM／F12无血清培养基中加入ITS (100mg／m1转铁蛋白、5mg／m1胰岛素、30nmoL/L亚硒酸)、孕酮(20nmoL/L)、腐胺(16mg／m1)、地塞米松(39pg／ml)、油酸甘油酯(10ng／m1)、牛血清白蛋白(1mg／ml)、生物素(1mg／mI)、甘油(3.6mg／m1)、表皮生长因子(100ng／m1)、成纤维细胞生长因子(0.4ng／m1)